ADN/ARN MICROARRAYS
Objetivo del experimento
El objetivo de esta práctica es comprender la técnica de microarrays y conocer como se aplica la genómica funcional. Esta práctica consiste en una simulación en la que se analizaran cuatro conjuntos de muestras, también simuladas, de cuatro pacientes distintos para determinar diferentes niveles de expresión génica; se analizaran las diferencias de la expresión génica con un microarray de dos colores.
Componentes del kit
- Cuatro muestras diferentes de microarrays Quickstrips
- Tarjeta de microarrays
**Todo este material deberá estar refrigerado en cuanto se reciba
Materiales (no suministrados)
- Micropipetas de volumen fijo ( 5 microlitros)
- Puntas de pipeta desechables
- Transiluminador
- Vaso de precipitados (rechazo)
Procedimiento de la práctica
En esta práctica habrá 16 muestras diferentes que han sido preconvertidas en ADNc en presencia de un marcador fluorescente incorporado durante la síntesis. Las muestras de ADNc de los pacientes se mezclan previamente con con el ADNc marcados obtenidos a partir de células normales de control. Se podrán observar las muestras de las tarjetas de microarrays en el orden establecido para cada
paciente. Los puntos de muestreo de las tarjetas contienen fragmentos de ADNc
sintetizados (por PCR) para cada uno de los ARNm de los pacientes. Las primeras
cuatro muestras en cada microarray QuickStrip (A a D) son muestras de control,
seguidas de cuatro muestras de pacientes (E a H). Las muestras de microarrays se
marcan con una o varias líneas; por ejemplo,en las muestras del paciente 1 (una línea), Paciente 2 (dos
líneas), y así sucesivamente.
Para obtener resultados correctos, es esencial que tengamos una buena técnica de pipeteo y saber en todo momento que muestra estamos cogiendo y de que paciente es dicha muestra.
La técnica de microarrays detecta aumentos o descensos en la regulación de los genes basándose en la expresión del ARNm de la célula, este ARNm asociado a los pacientes se convierte en ADNc que está asociado a un marcador fluorescente rojo. Después se mezclan las dos muestras (paciente y control) y se hibridan a un chip de genes de microarrays. Después de la hibridación el chip de genes, se lee con ayuda de un transiluminador con fluorescencia.
Precauciones
Aunque no se utilice material humano en esta práctica, debemos seguir unas pautas de seguridad :
- Usar guantes y gafas de laboratorio
- No pipetear con la boca
- Lavarse las manos antes de empezar la práctica y después de terminarla
Pasos a realizar
1. Separamos las muestras con ayuda de unas tijeras y las marcamos con un rotulador. Al paciente 1, le marcamos con una línea, al paciente 2 con dos líneas, y así sucesivamente.
2. Cada grupo recibe un conjunto de 4 tiras de muestras, marcadas con el número de paciente que corresponda.
3. Golpeamos las tiras de las muestras contra las mesas, con golpes suaves. Así nos aseguramos que la muestra se quede en el fondo de los pocillos.
4. Tomamos una tarjeta de microarrays, en el que los puntos A-D representan a las muestras control y los puntos E-H representan a las muestras experimentales.
5. Con ayuda de la punta de la micropipeta, agujereamos la superficie de la tira de la muestra, teniendo cuidado de no tirar la muestra.
6. Pipeteamos la muestra y la depositamos en el círculo que corresponde en la tarjeta.
7. Cuando tengamos todas las muestras, depositamos la tarjeta en la incubadora a 37ºC durante 5 minutos, para que las muestras se sequen.
8. Visualizamos la tarjeta en un transiluminador con luz UV
9. Apuntamos los resultados y los analizamos.
Para obtener resultados correctos, es esencial que tengamos una buena técnica de pipeteo y saber en todo momento que muestra estamos cogiendo y de que paciente es dicha muestra.
La técnica de microarrays detecta aumentos o descensos en la regulación de los genes basándose en la expresión del ARNm de la célula, este ARNm asociado a los pacientes se convierte en ADNc que está asociado a un marcador fluorescente rojo. Después se mezclan las dos muestras (paciente y control) y se hibridan a un chip de genes de microarrays. Después de la hibridación el chip de genes, se lee con ayuda de un transiluminador con fluorescencia.
Precauciones
Aunque no se utilice material humano en esta práctica, debemos seguir unas pautas de seguridad :
- Usar guantes y gafas de laboratorio
- No pipetear con la boca
- Lavarse las manos antes de empezar la práctica y después de terminarla
Pasos a realizar
1. Separamos las muestras con ayuda de unas tijeras y las marcamos con un rotulador. Al paciente 1, le marcamos con una línea, al paciente 2 con dos líneas, y así sucesivamente.
2. Cada grupo recibe un conjunto de 4 tiras de muestras, marcadas con el número de paciente que corresponda.
3. Golpeamos las tiras de las muestras contra las mesas, con golpes suaves. Así nos aseguramos que la muestra se quede en el fondo de los pocillos.
4. Tomamos una tarjeta de microarrays, en el que los puntos A-D representan a las muestras control y los puntos E-H representan a las muestras experimentales.
5. Con ayuda de la punta de la micropipeta, agujereamos la superficie de la tira de la muestra, teniendo cuidado de no tirar la muestra.
6. Pipeteamos la muestra y la depositamos en el círculo que corresponde en la tarjeta.
7. Cuando tengamos todas las muestras, depositamos la tarjeta en la incubadora a 37ºC durante 5 minutos, para que las muestras se sequen.
8. Visualizamos la tarjeta en un transiluminador con luz UV
9. Apuntamos los resultados y los analizamos.
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